Indicações para o teste:

• Terapia alvo em câncer, neoplasias com amplificação de HER2 são candidatos a inibição da proteína receptor 2 do fator de crescimento epidérmico humano (HER2).
• Preditivo de resposta à terapia (trastuzumab, pertuzumab, lapatinib): Carcinoma de mama; Carcinoma gastroesofágico; Carcinoma urotelial; Outros.
• Confirma a presença de amplificação de HER2 em casos com superexpressão de proteína HER2 2+ ou 3+ por imuno-histoquímica.

Procedimento e interpretação do teste:

Importante: Para ideal realização deste exame é obrigatório o envio da lâmina da reação imuno-histoquímica do HER2. Caso não seja enviada, o iNova se reserva o direito de providenciar este material, mediante cobrança deste serviço adicional.

O tecido fixado em formalina e embebido em parafina em uma lâmina de vidro é desparafinizado e depois tratado com pepsina para digerir as proteínas do tecido e permitir que as sondas atinjam o DNA alvo. O DNA é então desnaturado pelo calor e subsequentemente permitido hibridizar com o conjunto de sondas específicas. Após a hibridização, as lâminas são lavadas para remover qualquer excesso de sondas não ligadas e os núcleos são corados com a coloração DAPI (4',6'-diamino-2-fenil-indol).

A enumeração dos sinais de fusão e separação é realizada por exame microscópico dos núcleos das células, usando um microscópio de fluorescência e equipado com filtros de emissão e excitação apropriados.
Os resultados são obtidos após análise de um mínimo de 50 núcleos interfásicos (100 no total) com os resultados expressos como a porcentagem de núcleos anormais.

Pode-se realizar o teste complementar usando imuno-histoquímica (IHC) quando o resultado do FISH estiver dentro de certos intervalos, conforme definido pela atualização de 2018 focada nas diretrizes da Sociedade Americana de Oncologia Clínica (ASCO)/College of American Pathologists. Para resultados FISH nas categorias ASCO/CAP Grupo 2, 3 e 4 (anteriormente denominados "equívocos"), o teste IHC pode ser adicionado.

Relevância clínica:

HER2 é um oncogene no braço longo do cromossomo 17 que é amplificado em aproximadamente 15% a 20% dos cânceres de mama.

A amplificação ou superexpressão de HER2 mostrou estar associada a uma menor sobrevida livre de doença e menor sobrevida global em câncer de mama.

Pacientes com amplificação ou superexpressão do gene HER2 são candidatos ao tratamento com os medicamentos que têm como alvo a proteína do receptor 2 do fator de crescimento epidérmico humano (HER2) ou suas vias (por exemplo, trastuzumab [Herceptin], pertuzumab).

O grau de amplificação do HER2 varia nos tumores. Alguns exibem altos níveis de amplificação, enquanto outros exibem amplificação de baixo nível.

Atualmente, não se sabe se pacientes com diferentes níveis de amplificação têm o mesmo prognóstico e resposta à terapia.

Casos raros podem não apresentar amplificação de HER2, mas ainda apresentam superexpressão da proteína HER2 demonstrada por imuno-histoquímica. O significado clínico da superexpressão da proteína HER2 na ausência de amplificação do gene HER2 não é claro. No entanto, esses pacientes podem ter um pior prognóstico e serem candidatos a tratamentos que visam a proteína HER2 ou suas vias.

Resultados e considerações:

A sonda é hibridizada para as áreas alvo apropriadas e os resultados expressos como uma razão de sinais HER2/CEP17.

Os resultados são interpretados com base nas diretrizes de 2018 estabelecidas pela American Society of Clinical Oncology (ASCO) e College of American Pathologists (CAP).

O teste usando IHC será realizado quando o resultado HER2 FISH for Grupo 2, Grupo 3 ou Grupo 4 (com base na Atualização Focada de 2018 das diretrizes ASCO/CAP).

Se a IHC for realizada e for negativa (0, 1+) ou positiva (3+), o resultado do ensaio FISH será considerado resolvido pela IHC como negativo ou positivo.

Se o ensaio IHC mostrar um resultado ambíguo (2+), a lâmina FISH é pontuada novamente dentro das áreas que mostram a coloração membranosa mais intensa (2+) e o resultado final é usado para determinar se o resultado é negativo ou positivo.

Os resultados devem ser interpretados no contexto dos achados clínicos, história familiar e outros dados laboratoriais. A interpretação incorreta dos resultados pode ocorrer se as informações fornecidas forem imprecisas ou incompletas.

Referências:

1. Wolff AC, Hammond MEH, Allison KH, et al: Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 Testing in Breast Cancer: American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists Clinical Practice Guideline Focused Update. J Clin Oncol. 2018 Jul 10;36(20):2105-2122 doi:10.1200/JCO.2018.77.8738
2. Wolff AC, Hammond ME, Hicks DG, et al: Recommendations for human epidermal growth factor receptor 2 testing in breast cancer: American Society for Clinical Oncology/College of American Pathologists clinical practice guideline update. J Clin Onc. 2013 Nov 1;31(31):3997-4013
3. Perez EA, Roche PC, Jenkins RB, et al: HER2 testing in patients with breast cancer: poor correlation between weak positively by immunohistochemistry and gene amplification by fluorescence in situ hybridization. Mayo Clin Proc. 2002 Feb;77(2):148-154
4. Romond EH, Perez EA, Bryant J, et al: Trastuzumab plus adjuvant chemotherapy for operable HER2-positive breast cancer. N Engl J Med. 2005 Oct 20;353(16):1673-1684
5. Perez EA, Romond EH, Suman VJ, et al: Four-year follow-up of trastuzumab plus adjuvant chemotherapy for operable human epidermal growth factor receptor 2-positive breast cancer: joint analysis of data from NCCTG N9831 and NSABP B-31. J Clin Oncol. 2011 Sep 1;29(25):3366-3373
6. Blumenthal GM, Scher NS, Cortazar P, et al: First FDA approval of dual anti-HER2 regimen: pertuzumab in combination with trastuzumab and docetaxel for HER2-positive metastatic breast cancer. Clin Cancer Res. 2013 Sep 15;19(18):4911-4916
7. Robidoux A, Tang G, Rastogi P: Lapatinib as a component of neoadjuvant therapy for HER2-positive operable breast cancer (NSABP protocol B-41): an open-label, randomized phase 3 trial. Lancet Oncol. 2013 Nov;14(12):1183-1192.