MSI
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MSI - Pesquisa PCR para Instabilidade de Microssatélites
Ao detectar mudanças no número de repetições de sequências de DNA conhecidas como microssatélites, este teste identifica defeitos no sistema de reparo do DNA.
Prazo:
20 dias úteis após o recebimento da amostra
Material / Meio de coleta:
Tecido tumoral / Bloco de parafina
Técnica:
PCR / RT-PCR / qPCR / Eletroforese Capilar
Topografia:
Tecido ósseo, Sistema nervoso central, Sistema linfático, Sistema digestório, Sangue e medula óssea, Pulmão, Pele, Partes moles, Múltiplas topografias / Agnóstico, Cabeça e pescoço
Aplicação Clínica:
Prognóstico, Diagnóstico, Preditivo e tratamento
Indicações para o teste:
- Identificar pacientes com alto risco para a síndrome de Lynch (câncer colorretal hereditário sem polipose).
- Usado na tomada de decisão clínica no contexto das implicações prognósticas e terapêuticas associadas aos fenótipos de instabilidade de microssatélites (MSI-H).
- Prognóstico e preditivo de câncer de cólon.
- Propensão maior para responder ao tratamento com imunoterapias (p. ex. anti-PD1).
Procedimento e interpretação do teste:
- Tipo de amostra: tecido tumoral.
- Preparação da amostra: Fixação de formalina (formalina tamponada neutra a 10%). Proteger do calor excessivo. Bloco de tecido ou 4 lâminas de 5 mícrons não coradas. (Mínimo: 3 slides).
- Extração de DNA, avaliação qualitativa e quantitativa.
- Metodologia: O exame de instabilidade de microssatélites é realizado por análise de fragmentação (PCR + análise de fragmentos por eletroforese capilar). Examinamos cinco mononucleotídeos (Painel Bethesda).
- Microssatélites: BAT-25, BAT-26, NR-21, NR-24, MONO-27 e três repetições de dinucleotídeos (D2S123, D17S250, D5S346).
Relevância clínica:
A forma mais comum de carcinoma colorretal hereditário é a síndrome de Lynch, um câncer colorretal hereditário sem polipose (HNPCC). A instabilidade de microssatélites é detectada em 90% dos tumores HNPCC e em 15% dos carcinomas colorretais esporádicos.
Pacientes com síndrome de Lynch também têm um risco aumentado de câncer do trato urogenital e outros carcinomas.
A herança desta doença é autossômica dominante. A causa da síndrome de Lynch é uma mutação germinativa em um dos genes responsáveis pela reparação de erros de replicação do DNA (mismatch repair genes-MMR genes), resultando na formação de tumores que são característicos com alto grau de instabilidade em curtas repetições em tandem de DNA (microssatélites). Esses tumores são, portanto, referidos como MSI-H (instabilidade de microssatélites alta).
Para o diagnóstico diferencial de MSI-H é frequentemente utilizada a detecção da mutação BRAF (V600E). Não existe tal mutação na síndrome de Lynch.
Um subgrupo de HNPCC é a síndrome de Muir-Torre (MTS), característica por tumores benignos e malignos da pele sebácea em combinação com malignidades internas. A alta instabilidade de microssatélites está presente em aproximadamente 70% desses tumores.
As proteínas MMR montam-se em complexos funcionais: heterodímero hMSH2-hMSH6 e heterodímero hMLH1-hPMS2. O primeiro desses dímeros reconhece erros no DNA e indica danos, enquanto o segundo corrige esses erros. Ao mesmo tempo, participa da parada do ciclo celular e indução de apoptose em resposta a danos no DNA.
O gene hMLH1 está localizado no cromossomo 3 na região p21.3 e possui 19 éxons. O gene hMSH2 está localizado no cromossomo 2 na região p21-22, contendo 16 éxons e na região p16 existe um gene hMSH6 composto por 10 éxons. O gene hPMS2 está localizado na região cromossômica 7p22.
Casos com MSI-estável podem ser interpretados como esporádicos ou indivíduos numa fase precoce da patologia, dependendo do status genético e epigenético (mutação e metilação) de genes MLH1 e MLH2.
Resultados e considerações:
- Negativo: o número de repetições dos microssatélites no tecido tumoral é igual ao encontrado no sangue periférico.
- Positivo: alta-MSI se mais de um dos marcadores registarem instabilidade; baixa-MSI se somente um dos marcadores registar instabilidade.
Os resultados devem ser interpretados no contexto dos achados clínicos, história familiar e outros dados laboratoriais. A interpretação incorreta dos resultados pode ocorrer se as informações fornecidas forem imprecisas ou incompletas.
Referências:
- Renkonen E, Zhang Y, Lohi H, et al: Altered expression of MLH1, MSH2, and MSH6 in predisposition to hereditary nonpolyposis colorectal cancer. J Clin Oncol. 2003 Oct 1;21(19):3629-37. doi: 10.1200/JCO.2003.03.181. PMID: 14512394.
- Loukola A, Eklin K, Laiho P, et al: Microsatellite marker analysis in screening for hereditary nonpolyposis colorectal cancer (HNPCC). Cancer Res. 2001. June 1;61(11):4545-9.
- Raedle J, Trojen J, Briege A, et al: Bethesda guidelines: relation to microsatellite instability and MLH1 promoter methylation in patients with colorectal câncer. Ann Intern Med. 2001 Oct16;135(8Pt1):566-76.